猪流行性腹泻病毒ELISA（IgA）抗体检测试剂盒

详细信息

猪流行性腹泻病毒ELISA（IgA）抗体检测试剂盒说明书

兽药名称
通用名称：猪流行性腹泻病毒ELISA（IgA）抗体检测试剂盒
商品名称：无
英文名称：Porcine Epidemic Diarrhea Virus Antibody （IgA）ELISA Test Kit
汉语拼音：Zhuliuxingxingfuxie Bingdu ELISA（IgA）Kangti Jianceshijihe

作用与用途
用于检测猪血清和初乳中的猪流行性腹泻病毒IgA抗体。

主要组分与含量

注意事项
1）试剂盒贮藏条件为2~8℃，开启前应确认其批号及有效期。
2）过期产品请勿使用，不同批号的试剂盒组分禁止混用，所有液体试剂倒出后不可二次使用。
3）试剂盒使用前各组分试剂均需于恒温箱（25℃±3℃）中放置至少60分钟，使用后放置2~8℃保存。
4）应避免检测过程中污染试剂盒中的试剂。
5）试验所用仪器（如：微量移液器、恒温培养箱、ELISA洗板机、酶标仪）需要在使用前进行功能检查，确保其可用性、准确性。
6）所有试剂严禁接触皮肤和粘膜。检测结束后所用耗材需按国家规定进行无害化处理。
7）移液器吸头必须一次一换。
8）未使用的微孔板条可装入密封袋中2~8℃保存。
9）试剂盒中各组分容器只针对该组分使用，不可二次利用。
10）仅供兽医诊断使用。

用法与判定
1、试剂准备
1）所有试剂恢复至25℃（±3℃）后使用。
2）1倍洗涤液的配制
10倍洗涤液使用超纯水进行10倍稀释，稀释后的洗涤液在2~8℃可以稳定保存1周。如配制100mL 1倍洗涤液需10mL 10倍洗涤液加90mL超纯水或ddH2O。
注意：10倍洗涤液有结晶时，务必完全溶解后再使用。
2、样品准备
1）尽量使用新鲜采集的血清或初乳样品。
2）不能用于检测严重污染或严重溶血的样品。
3）如果样品浑浊，需离心后取上清进行检测。
4）检测样品可在2~8℃保存5天，长时间保存时需要转移至-20℃或更低温环境中。
3、样品稀释及阴、阳性对照血清稀释
血清样品稀释。血清样品进行50倍稀释。在稀释板中每孔加入245μL样品稀释液，各孔加入5μL血清样品，充分混匀。初乳样品稀释。初乳样品采用2步法进行500倍稀释。第一步对样品进行50倍稀释，稀释板中每孔加入245μL样品稀释液，
各孔加入5μL初乳样品，充分混匀；第二步对已稀释样品进行10倍稀释，稀释板中每孔加入135μL样品稀释液，随后各孔加入15μL第一步已稀释样品，充分混匀。
禁止稀释阳性对照血清（PC）与阴性对照血清（NC）。
4、操作步骤
1）将所有组分从试剂盒中取出，在恒温箱（25℃±3℃）中放置至少60分钟。
2）按照“微孔板加样位置示例图”向抗原包被板指定孔中加入100μL提前在稀释板中稀释后的样品。
3）向指定孔中分别加入100μL未稀释的阴性对照血清（NC）和阳性对照血清（PC）。
4）盖上封板膜，在恒温箱（37℃±1℃）中孵育60分钟（±1分钟）。
5）用ELISA洗板机或微量移液器洗板，弃去孔中液体，每孔加入300μL1倍洗涤液，洗涤3次。最后一次洗涤后将酶标板在吸水纸上轻轻拍干，严禁各步骤之间板孔出现干燥情况。
6）每孔加入100μL PEDV HRP标记抗体。
警告：倒出瓶的HRP标记物禁止再次使用。
7）盖上封板膜，在恒温箱（37℃±1℃）中孵育40分钟（±1分钟）。
8）重复步骤5）。
9）每孔中加入100μL TMB底物液。
10）盖上封板膜，在恒温箱（25℃±3℃）中孵育15分钟（±1分钟）。
11）每孔中加入50μL终止液，终止酶促反应。
12）使用450nm波长测量吸光度值（OD值）。
13）结果判定与计算。

5、判定
1）试验成立条件
阳性对照OD450nm平均值＞0.25；
阴性对照OD450nm平均值＜0.1；
如果检测结果不在界定范围内则需要重新进行检测。
2）计算方法

3）S/P值计算公式

4）判定标准

规格参数

包装