非洲猪瘟病毒荧光PCR检测试剂盒

详细信息

【兽药名称】
通用名：非洲猪瘟病毒荧光 PCR 检测试剂盒
商品名：无
英文名：Real–time PCR Kit for Detection of African Swine Fever Virus
汉语拼音：Feizhouzhuwenbingdu yingguang PCR Jiance Shijihe
【主要成分与含量】

【作用与用途】
用于猪血清、血浆、脾脏、淋巴结、扁桃体等样本中的非洲猪瘟病毒核酸检测。
【用法与判定】
1 用法
1.1 样本处理
1.1.1 组织样品前处理 取 1g 组织病料于研磨器具中，加入无菌生理盐水 5ml，样品取样量重量/体积比为 1/5（g/ml），研
磨匀浆后将组织悬液转移至无菌离心管，3000r/min 离心 2 分钟，取上清待用。
1.1.2 血液样品前处理 血清、血浆无需预处理，保存待用；严重溶血的血清、血浆和其它复杂样品类型建议使用商品化
病毒核酸提取试剂盒进行 DNA 的提取和纯化。
1.2 核酸提取（直接裂解法） 吸取样品裂解液 100μl 于 1.5ml 离心管中，加入经前处理的组织匀浆上清或血清、血浆等
样品 20μl，充分混匀后 95℃处理 10 分钟，然后 12000r/min 离心 1 分钟，取上清作为模板进行扩增。注意裂解上清应尽快进行
后续试验。样本也可以使用商业化病毒核酸提取试剂盒进行 DNA 的提取和纯化。
1.3 反应体系配制
1.3.1 取出包装盒中的各组分（酶除外），室温放置，待其温度平衡至室温，混匀后瞬时离心备用。
1.3.2 在灭菌的 1.5ml 离心管中制备符合试验样本数量（包括阳性对照、阴性对照）的 PCR 混合液（至少额外多制备一个
反应的量）。单反应按下表比例配制，充分混匀成 PCR 混合液，瞬时离心备用。

1.3.3 根据待测样本、阴性对照、阳性对照的数量准备反应管，向每个反应管加入 PCR 混合液 40μl。
1.3.4 吸取已处理的样本 DNA、阴性对照、阳性对照各 10μl 加入对应反应管，盖好管盖。
1.4 PCR 扩增
1.4.1 将 PCR 反应管放入扩增仪样品槽，按对应顺序设置阴性对照、阳性对照及待测样本名称。
1.4.2 设置反应体系为 50μl，选择 FAM 通道检测 ASFV 核酸，选择 HEX 通道检测内标，反应程序如下∶

2 判定
2.1 试验成立条件
阴、阳性对照 HEX 检测通道 Ct 值≤35，且均出现典型的扩增曲线；阴性对照 FAM 通道无 Ct 值显示且无典型扩增曲线；
阳性对照 FAM 通道 Ct 值≤30，且出现典型的扩增曲线。以上要求需要在同一次试验中同时满足，否则本次试验无效，需重新
进行。
2.2 结果判定 阈值线依据仪器噪声情况进行调整，以刚好超过阴性对照品扩增曲线的最高点为准。根据扩增 Ct 值与扩
增曲线进行结果判定。
2.2.1 HEX 通道 Ct≤35，且有明显扩增曲线，对样本进行结果判定∶
2.2.1.1 FAM 通道 Ct≤35，且有明显扩增曲线，该样品判为阳性；
2.2.1.2 35＜FAM 通道 Ct 值＜40，该样品判为可疑，可疑的样品复检一次，根据复检结果进行判定，如仍为可疑，则判
为阳性；
2.2.1.3 FAM 通道无 Ct 值，且无明显扩增曲线，则判为阴性。
2.2.2 如出现其它情形该样本判为无效结果，需重复检验。
【注意事项】
（1）试验前请熟悉和掌握需使用的各种仪器的操作方法和注意事项，对每次试验进行质量控制。
（2）实验室管理应严格按照 PCR 基因扩增实验室的管理规范，试验人员必须进行专业培训，试验过程严格分区进行，所
用消耗品应灭菌后一次性使用，试验操作的每个阶段使用专用的仪器和设备，各区各阶段用品不能交叉使用。
（3）所有的试剂在使用前，均需在室温下充分融化、混匀后使用，使用完后放回-15℃以下。
（4）不同批号试剂盒的试剂组分不得混用，使用试剂时应防止试剂交叉污染。
（5）在操作过程中移液时，尽量避免将气泡加入检测孔中。
（6）试剂盒中各组分应避免反复冻融。
（7）对样品及其废弃物的操作应严格遵守生物安全规定。
（8）本试剂盒仅供兽医及相关专业人士使用。
【规格】 （1）25 检测/盒 （2）50 检测/盒
【贮藏与有效期】 -15℃以下避光保存，有效期为 12 个月。
【批准文号】 兽药生字180568901
【生产企业】 湖南国测生物科技有限公司

规格参数

包装